|
|
|
*
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
E-Mail:
info@chemilum.ru
|
Телефон:
+7 (495) 961-47-30
|
|
Метод тканевой хемилюминесценции
|
Термином тканевая хемилюминесценция обозначается хемилюминесцентное свечение, обусловленное свободными радикалами,
образующимися в митохондриях клеток в результате нормального физиологического процесса окислительного фосфорилирования.
Методом тканевой хемилюминесценции исследуют изолированные участки биологической ткани (биоптаты, срезы, пунктаты и т.п.),
в которых сохранена целостность и жизнеспособность клеток.
Таким образом, тканевая хемилюминесценция связана с естественным процессом жизнедеятельности всех клеток биологической ткани,
а не со специфическим ответом отдельных типов клеток на стимул (клеточная хемилюминесценция).
Принцип метода тканевой хемилюминесценции заключается в том, чтобы обеспечить в условиях in vitro (т.е. в пробирке) естественную жизнедеятельность биологической ткани,
такую же, как и в живом организме или близкую к ней.
Общая схема применения метода тканевой хемилюминесценции показана на рисунке слева.
При извлечении биологической ткани из организма нарушается поступление в нее питательных веществ и кислорода, а также изменяется температурный режим.
Для восстановления нормальных условий жизнедеятельности кусочек биологической ткани (1) инкубируется в физиологической среде (2),
которая аэрируется воздухом или газовой смесью (3) для поддержания постоянного уровня насыщения кислородом.
Существенной особенностью метода тканевой хемилюминесценции является применение специального активатора (усилителя) хемилюминесценции – люцигенина,
обеспечивающего преимущественное детектирование супероксидных радикалов, образующихся в митохондриях.
Метод тканевой хемилюминесценции может быть использован для решения следующих научных и прикладных задач:
- Определение жизнеспособности биологической ткани.
В результате нарушения кровоснабжения органов и тканей прекращается доступ кислорода к клеткам, что приводит остановке работы дыхательной цепи митохондрий.
В течение короткого времени гипоксии работа дыхательной цепи митохондрий еще может быть восстановлена, т.е. биологическая ткань сохраняет жизнеспособность.
Но длительное состояние гипоксии приводит к необратимым нарушениям работы дыхательной цепи митохондрий, что можно охарактеризовать как потерю жизнеспособности ткани.
Метод тканевой хемилюминесценции позволяет определить способность биологической ткани, оказавшейся в состоянии гипоксии, восстанавливать работу дыхательной цепи после возобновления оксигенации,
т.е. способность к жизнедеятельности после восстановления нормальных физиологических условий, например, после восстановления кровоснабжения.
Метод тканевой хемилюминесценции может иметь важное практическое значение, например, в хирургии и трансплантологии для определения способности к восстановлению и приживлению оперируемых и пересаживаемых органов.
Одним из преимуществ метода тканевой хемилюминесценции является возможность ранней диагностики функциональных нарушений жизнеспособности клеток, которые предшествуют структурным нарушениям, выявляемым морфологическими методами.
- Определение устойчивости биологической ткани к гипоксии. Описанный в предыдущем пункте подход к определению жизнеспособности ткани
может быть использован также для научного изучения переносимости гипоксии различными типами тканей.
Метод тканевой хемилюминесценции позволяет в экспериментальных условиях варьировать длительностью гипоксии, определяя временной интервал, в течение которого сохраняется жизнеспособность образца биологической ткани.
- Определение токсичности. Метод тканевой хемилюминесценции позволяет в экспериментальных условиях исследовать воздействие различных факторов и веществ (например, ядов и токсинов)
на работу дыхательной цепи митохондрий, определяя степень и механизмы их токсичности.
Рекомендуемое оборудование
Для реализации метода тканевой хемилюминесценции рекомендуется использовать следующее оборудование:
- Хемилюминометр Lum-100 - обеспечивает термостатирование и возможность аэрации исследуемой пробы.
- Перистальтический насос с регулируемой скоростью потока.
|
Публикации
|
АКТИВИРОВАННАЯ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИЯ КАК МЕТОД ОЦЕНКИ РАДИКАЛОБРАЗУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ ТКАНИ МОЗГА
Полимова А.М., Хакимова Г.Р., Владимиров Г.К., Жидкова Т.В., Измайлов Д.Ю., Проскурнина Е.В., Угрюмов М.В., Владимиров Ю.А.
ТЕХНОЛОГИИ ЖИВЫХ СИСТЕМ, 2012, Т.9, №10, C.3-13
Разработана методика исследования радикалобразующей способности ткани мозга, основанная на регистрации люцигенин-активированной ХЛ.
Выявлено, что за люцигенин-активированную ХЛ ответственны супероксид радикалы (САР), образующиеся в митохондриях.
С помощью предложенной методики показано увеличение внутриклеточного образования САР в ранней симптомной стадии токсин-индуцированного паркинсонизма у мышей.
|
|
ТКАНЕВАЯ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИЯ КАК МЕТОД ОЦЕНКИ СУПЕРОКСИД РАДИКАЛ-ПРОДУЦИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ МИТОХОНДРИЙ
Джатдоева А.А., Полимова А.М., Проскурнина Е.В., Владимиров Ю.А.
ВЕСТНИК РГМУ, 2016, №1, C.54-60
Дисфункция митохондрий лежит в основе развития многих заболеваний человека, включая дегенеративные.
Одно из следствий митохондриальной дисфункции — апоптоз функционально-активных клеток.
На начальной стадии апоптоза отмечается усиление продукции супероксид анион-радикала (САР).
Перспективным методом обнаружения САР в клетках и тканях является метод хемилюминесценции (ХЛ),
прежде всего — в присутствии люцигенина, специфичного для САР химического активатора ХЛ.
|
|
МИТОХОНДРИИ КАК ИСТОЧНИКИ СУПЕРОКСИДНОГО АНИОН-РАДИКАЛА В ТРОМБОЦИТАХ
А. А. Джатдоева, Е. В. Проскурнина, А. М. Нестерова, И. В. Дубинкин, Т. В. Гапонова, С. И. Обыденный, Ю. А. Владимиров
БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕМБРАНЫ, 2017, Т. 34, № 6, С. 116–123
Методом активированной хемилюминесценции (ХЛ) исследована радикал-продуцирующая способность тромбоцитов человека.
Показано, что только в присутствии селективного зонда на супероксид-анион люцигенина регистрируется хемилюминесценция изолированных тромбоцитов,
причем это свечение усиливается многократно при добавлении субстратов окислительных цепей NADH и NADPH.
На хемилюминесценцию не влияет ингибитор NADPH-оксидазы дифенилйодоний, но ее ингибируют дозозависимо разобщители фосфорилирования динитрофенол и ротенон.
Таким образом, основным свободным радикалом, генерируемым тромбоцитами, является супероксидный анион-радикал, а одним из источников супероксидного анион-радикала
в тромбоцитах – митохондрии.
|
|
Патенты
|
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ТКАНИ И ПРИМЕНЕНИЕ ЭТОГО СПОСОБА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЕЕ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ И/ИЛИ СТЕПЕНИ НЕКРОТИЗАЦИИ
Измайлов Д.Ю., Владимиров Ю.А., Полимова А.М.
ЕВРАЗИЙСКИЙ ПАТЕНТ № 018686
Изобретение относится к области медицины, биологии, фармакологии, токсикологии.
Предложен способ определения функционального состояния биологической ткани по изменению интенсивности свечения при разной интенсивности аэрации.
Технический результат - повышение точности определения функционального состояния биологических тканей.
|
|
|
|
В начало страницы
|
|